Endogenna regulacja terapeutycznego transgenu przywraca homeostazę w stawach artretycznych ad 5

Ponowna aktywacja zapalenia stawów powodowała uderzający wzrost poziomów hIL-10 w dniach i 2, powracając do poziomu zbliżonego do poziomu początkowego (niereaktywowanego) w dniu 4 (Figura 5a). Ponieważ na odczyty ELISA mogą mieć wpływ różne inhibitory często występujące w płynach biologicznych, dodatkowo zbadano ekspresję hIL-10 za pomocą Western blotting. Jak pokazano na Figurze 5b, jakościowe oceny oparte na analizie Western blot były w dobrej zgodności z odczytami ELISA. W przeciwieństwie do stawów, którym wstrzyknięto Ad.C3-tat / HIV a hIL-10, wytwarzanie hIL-10 z Ad.CMV y hIL-10 utrzymywało się na stałym poziomie przez cały okres obserwacji (Figura 5b). Obserwowana przedłużona ekspresja Ad.CMV (3IL-10 jest zgodna z naszą poprzednią obserwacją, że ekspresja białka reporterowego zielonej fluorescencji kierowanej przez CMV utrzymywała się przez co najmniej tydzień po przeniesieniu genu Ad do artretycznych stawów szczurów (16). To obala możliwość, że odcięcie indukowalnej przez zapalenie ekspresji hIL-10 w dniu 4 było następstwem odpowiedzi immunologicznej skierowanej przeciwko komórkom transdukowanym Ad. Innym możliwym wytłumaczeniem jest to, że supresja antyapoptotycznego NF-a. droga (16) przez IL-10 może prowadzić do eliminacji komórek zakażonych Ad; jednakże trwałość wywołanej przez CMV ekspresji hIL-10 (Figura 5b) przemawia przeciwko tej możliwości. Ponadto indukowana przez zapalenie ekspresja lucyferazy utrzymywała się przez dzień 4 (Figura 2c), silnie sugerując, że szybki spadek ekspresji Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 był bezpośrednią konsekwencją hamowania zapalenia za pośrednictwem hIL-10. późniejsza regulacja w dół indukowalnego przez zapalenie promotora. Wnioskujemy zatem, że transfer genów za pośrednictwem Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 tworzy pętlę ujemnego sprzężenia zwrotnego podobną do pętli zaangażowanych w homeostatyczną regulację endogennych genów zapalnych. Figura 5 Ekspresja indukowalnego transgenu hIL-10 in vivo. (a) Reaktywowane vs nieuaktywowane stawy. Zwierzęta z zachowanymi stawami skokowymi PG-APS otrzymały IA Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 w dniu. 2. Zapalenie stawów reaktywowano u połowy zwierząt przez dożylne PG-APS (czarne słupki) w dniu 0. Drugą połowę wstrzyknięto dożylnie solą fizjologiczną (białe słupki). Stężenie hIL-10 w perfuzatach stawowych oceniano za pomocą testu ELISA. Każdy pasek pokazuje średnią. SEM z czterech stawów. W grupie niereaktywowanej stężenia hIL-10 były na poziomie lub poniżej granicy wykrywalności (1 ng / ml). W grupie kontrolnej (zwierzęta wstrzyknięte Ad.C3-tat / HIV-luc) ekspresja lucyferazy osiągnęła pik w dniu 4 po ponownej aktywacji (dane nie pokazane). (b) ekspresja ekspresji transgenu konstytutywnej vs. indukowalnej. W podobnym eksperymencie zwierzęta poddano iniekcji w dniu 2 za pomocą konstytutywnej Ad.CMV-hIL-10 lub indukowalnej Ad.C3-tat / HIV a hIL-10. Po reaktywacji zapalenia stawów (dzień 0) poziomy hIL-10 w płucach stawowych oceniano metodą Western blotting. Ad.RR5: perfuzaty stawów wstrzykniętych pustą reklamą. Każda ścieżka reprezentuje pulę czterech stawów. W równoległym eksperymencie kontrolnym zwierzęta poddano iniekcji z użyciem reportera Ad.C3-tat / HIV-luc, którego ekspresja utrzymywała się przez dzień 4 (dane przedstawione na Figurze 2c). (c) Poziomy indukowanej zapaleniem hIL-10 korelują z ciężkości zapalenia stawów. Każdy punkt reprezentuje dane z niezależnego eksperymentu i jest średnią z czterech lub więcej połączeń (patrz tabela 1); słupki błędów są równe. SEM. Abscissa: maksymalny obrzęk wywołany przez SCW u zwierząt kontrolnych stanowiących odpowiednik (wstrzyknięty z pustą lub z reporterem Ad). Rzodkiew: maksymalna średnia indukcja hIL-10 [hIL-10 (reaktywowane stawy) / hIL-10 (nie reaktywowane stawy)] u zwierząt, którym wstrzyknięto AD.C3-tat / HIV. HIL-10. Nasilenie nawrotowych artretyzmu SCW u szczurów można regulować zmieniając dawki wewnątrzstawowego i dożylnie wstrzykiwanego PG-APS oraz przerwy między aktywacją a reaktywacją (12). Pozwoliło nam to na zbadanie związku pomiędzy nasileniem nawracającego zapalenia stawów a wytwarzaniem indukowalnego przez zapalenie zapalenia hIL-10. W trzech niezależnych eksperymentach poziomy IA hIL-10 w stawach, którym wstrzyknięto Ad.C3-tat / HIV (3 hIL-10, wzrosły 16-, 70- i 288-krotnie powyżej linii podstawowej do dnia 2. 4 (Tabela 1). Maksymalna indukcja fałdu w stężeniu hIL-10 była bezpośrednio związana z ciężkością artretyzmu SCW w odpowiednich grupach kontrolnych (r = 0,93) (Figura 5c). W tych eksperymentach poziomy IA hIL-10 powróciły do poziomu zbliżonego do dnia 4. Dane te sugerują silnie, że indukowana przez zapalenie ekspresja hIL-10 miała bezpośredni związek z intensywnością i czasem trwania stanu zapalnego. Dyskusja Celem naszej pracy było przetestowanie koncepcji PRGT w leczeniu nawrotu przewlekłego stanu zapalnego. Korzyści płynące z tego podejścia wydają się oczywiste, ale nie udało się jeszcze ustalić wykonalności samoregulującej terapii przeciwzapalnej.
[hasła pokrewne: dieta dukana faza uderzeniowa, chemioterapia adjuwantowa, kuchnia niemiecka prezentacja ]
[przypisy: przychodnia langiewicza rzeszów, frytki z piekarnika kalorie, kuchnia niemiecka prezentacja ]