Endogenna regulacja terapeutycznego transgenu przywraca homeostazę w stawach artretycznych ad 6

Wykazano, że liczne transgeny zapobiegają eksperymentalnemu zapaleniu stawów, w tym IL-10, rozpuszczalnym receptorom TNF, antagonistom receptora IL-1, ligandowi Fas i TGF-a. (13, 25-29) i opisano kilka promotorów indukowalnych przez zapalenie (10, 14, 30, 31). Jednak nie było zupełnie jasne, czy autoregulowany system będzie działał w celu zapobiegania stanom zapalnym in vivo. Fakt, że nasz dwuskładnikowy konstrukt indukowalny przez zapalenie reagował na wysokie stężenie układowych bodźców zapalnych (np. LPS i terpentyna) był zachęcający, ale to nie gwarantowało podobnej reakcji promotora na nawrót przewlekłego stanu zapalnego, lub działałoby to w kontekście błony maziowej. Nie było również jasne, czy promotor może indukować ekspresję namacalnych ilości białek terapeutycznych. Nie wiedzieliśmy także, czy indukowalna produkcja IL-10 będzie korzystna, ponieważ nieodpowiedni czas może zmniejszyć skuteczność białek przeciwzapalnych (9). W tym kontekście nowością i znaczeniem naszej pracy jest wykazanie, że możliwa jest autoregulacyjna terapia genowa w reumatoidalnym zapaleniu stawów. Wyraźną zaletą tej strategii jest to, że hamuje ona stan zapalny, niosąc minimalne ryzyko toksyczności tkanki lub tachyfilaksji w wyniku trwałej nadprodukcji produktu (ów) transgenu. W tej metodzie, w porównaniu z innymi metodami podawania leku przeciwzapalnego, można również zmniejszyć ryzyko niepożądanej immunosupresji: lek można wytwarzać wtedy, gdy, w niezbędnej ilości, i tylko tak długo, jak to jest konieczne dla kontroli. lokalnego zapalenia. Nasze badanie reprezentuje dowód zasady, a nie opis konstruktu natychmiast dostępnego do użytku klinicznego. Najpoważniejszym problemem praktycznym pozostaje wybór wektora do dostarczania genu indukowalnego przez zapalenie. Wiadomo, że wektory reklamowe indukują stan zapalny w obrębie stawu około 2 tygodnie po infekcji Ad. To ograniczenie uniemożliwiło badanie długoterminowych skutków ekspresji indukowalnej przez zapalenie w niniejszym badaniu. Pod tym względem, może być korzystne zastosowanie wektorów o niskiej immunogenności, takich jak wektory oparte na wirusie adenowirusowym (32), zwłaszcza, że podobna ekspresja wirusów opartych na wirusach związanych z adenowirusami jest podobno podwyższona w stanach zapalnych (33. 35). Innym problemem było to, że ekspresja Tat w naszym promotorze może powodować niepożądane efekty, np. Cytotoksyczność, immunogenność i zapalenie. Sprawdziliśmy to w kilku eksperymentach. W jednym zestawie eksperymentów porównaliśmy obrzęk wywołany w zagruntowanych stawach PG-APS. Przez Ad.C3-tat / HIV-luc z wytwarzanym przez puste wektory Ad.RR5 i Ad.CMV; nie znaleźliśmy żadnej znaczącej różnicy (dane nie są pokazane). W innym zestawie eksperymentów, po porównaniu nasilenia nawrotu zapalenia stawów wywołanego przez PG-APS w stawach, którym wstrzyknięto Ad.C3-tat / HIV-luc, Ad.RR5 i roztwór soli, również nie zaobserwowaliśmy znaczących różnic (dane nie pokazane). ). Zakażenie komórkami maziówkowymi w wysokim mianie (100 PFU / komórkę) in vitro wektorami Ad zawierającymi promotor C3-tat / HIV nie powodowało cytotoksyczności (dane nie przedstawione). Ponieważ stosowaliśmy niskie miana in vivo (107 PFU / staw, co w naszej ocenie odpowiadało mniej niż PFU / komórkę in vivo), powoduje to, że cytotoksyczne działanie C3-tat / HIV in vivo jest mało prawdopodobne. Te obserwacje przemawiają przeciwko cytotoksycznym i prozapalnym działaniu Tat w naszych eksperymentach. Jednym z możliwych wyjaśnień jest to, że wiele efektów Tat przypisano drugiemu eksonowi tat, który nie występuje w naszym konstrukcie. Inną możliwością jest to, że w konstruktach dwuskładnikowych C3-tat / HIV ekspresja Tat jest kierowana przez słaby promotor C3. Jak wykazaliśmy wcześniej, nawet w pełni indukowany promotor C3 zapewnia ekspresję, która jest dwa do trzech rzędów wielkości niższa niż uzyskana dla silnych promotorów wirusowych (11, 14); dlatego ilość białka Tat powinna być znacznie mniejsza niż ta opisana w większości eksperymentów z użyciem konstytutywnie nadekspresjonowanej Tat. Podsumowując, nasze dane wskazują, że transgen regulowany fizjologicznie uzupełnia niedostateczną endogenną odpowiedź przeciwzapalną, stając się integralną częścią negatywnego fizjologicznego sprzężenia zwrotnego do zapalenia. Potencjalne cele kliniczne w endogennie regulowanej terapii genowej nie ograniczają się do reumatoidalnego zapalenia stawów; obejmują one szereg przewlekłych chorób zapalnych, takich jak choroba Leśniowskiego-Crohna i odrzucenie przeszczepu narządu (10). Powinno być możliwe regulowanie produkcji wielu różnych białek w ten sposób, przy użyciu wektorów i promotorów indukowalnych przez zapalenie, które, podobnie jak terapeutyczny transgen, są dostosowane do określonych warunków klinicznych. Zasada endogennie regulowanej terapii genowej do leczenia zapalenia nie powinna zatem być ograniczona do badanego systemu promotora i transgenu. Podziękowania Dziękujemy Stevenowi Haskillowi, Al Baldwinowi, Michaelowi Brownowi i Richardowi Gaynorowi za skomentowanie manuskryptu Rogera Browna za przygotowanie PG-APS oraz Julii Romashkovej, Dmitry Kovalenko, Steven M. Geiszler i Abrama Trevino za pomoc techniczną. Praca ta była wspierana przez granty zdrowia publicznego NIH AR / AI-44564, 5-P60 AR-30701-14 i AR / AI-44030 (do A. Miagkova i S. Makarova); i AI-38596 (do A. Varley i R. Munford). S. Makarov jest laureatem nagrody Investigator Award od The Arthritis Foundation. FootnotesA.V. Obecny adres Miagkova to: Department of Neurology, Johns Hopkins School of Medicine, Baltimore, Maryland, USA.
[więcej w: wojewódzka przychodnia stomatologiczna gdańsk, implanty dąbrowa górnicza, dieta dukana faza uderzeniowa ]
[patrz też: wojewódzka przychodnia stomatologiczna gdańsk, ortodonta gdańsk nfz, akademia medyczna gdańsk stomatologia ]