Endogenna regulacja terapeutycznego transgenu przywraca homeostazę w stawach artretycznych czesc 4

Dlatego skonstruowaliśmy wektor adenowirusowy (Ad.C3-tat / HIV. HIL-10) wyrażający cDNA hIL-10. Kontrolne wirusy to Ad.C3-tat / HIV-luc, pusty wektor Ad.RR5, i Ad.CMV (3 hIL-10, Ad, który produkuje hIL-10 konstytutywnie pod kontrolą promotora CMV. Komórki maziowe zakażone in vitro Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 wytwarzały niewykrywalne ilości hIL-10, podczas gdy leczenie TNF-a lub LPS skutkowało wydzielaniem hIL-10 w stężeniach podobnych do tych wytwarzanych przez komórki zakażone Ad.CMV (3IL-10 (Figura 3a). Wydzielona hIL-10 była biologicznie czynna: skutecznie antagonizowała indukcję aktywności wiązania NF-kB DNA w pierwotnych synowiocytach w odpowiedzi na TNF-a. (Figura 3b), zapobiegał aktywacji ekspresji genu reporterowego NF-kB w TNF-a. i stymulowane LPS fibroblasty L929 (nie pokazano) i hamowane wytwarzanie IL-6 przez stymulowane LPS makrofagi myszy (nie pokazano). Figura 3 (a) indukowalne zapalnie wytwarzanie hIL-10 w pierwotnych fibroblastach maziówkowych in vitro. Komórki zakażono jak na Figurze 2a i stymulowano LPS (1 .g / ml) lub TNF-a. (10 ng / ml) przez 48 godzin. Poziomy hIL-10 w kondycjonowanych pożywkach oceniano metodą Western blotting. Pasmo hIL-10 zidentyfikowano przez porównanie z rekombinowanym standardem hIL-10 (nie pokazano). Przedstawiono reprezentatywne dane dwóch niezależnych eksperymentów. (b) Adenowirusowa hIL-10 hamuje aktywację NF-kB in vitro. Kondycjonowaną pożywkę ze stymulowanych TNF-infected zakażonych komórek (pokazanych w ścieżkach 3, 6 i 9) dodano do niezainfekowanych pierwotnych fibroblastów maziówkowych; gdzie wskazano, dodano także rekombinowaną hIL-10 (rhIL-10; 100 ng / ml). Po 10 minutach preinkubacji TNF-a (100 ng / ml) dodano w 15-minutowym okresie inkubacji. Aktywność wiązania NF-kB DNA w ekstraktach jądrowych analizowano za pomocą testu zmiany elektromobilności (EMSA). NS, niespecyficzne zespoły. Przenoszenie genu hIL-10 indukowalnego przez zapalenie zapobiega reaktywacji SCZ. W celu oceny skuteczności terapeutycznej indukowanej przez zapalenie ekspresji hIL-10, wstępnie obciążone PG-APS. Szczurze stawy skokowe zostały wstrzyknięte Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 lub wektory kontrolne 1. 2 dni przed reaktywacją zapalenia stawów za pomocą dożylnej wstrzyknięcie PG-APS. Nasilenie stanu zapalnego po ponownej aktywacji oceniano przez pomiar obrzęku stawów (13, 16) i liczby leukocytów w obrębie stawów (24). Jak ustalono w dwóch niezależnych eksperymentach, transfer genów hIL-10 indukowalnej przez zapalenie zapewnił skuteczną ochronę przed leukocytozą wywołaną reaktywacją (Figura 4a i dane nie pokazane). Indukowany zapaleniem transfer genu hIL-10 również znacząco hamuje obrzęk stawów (Figura 4b). Zahamowanie obrzęku stawów za pomocą transferu genów Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 było istotne statystycznie w czterech niezależnych doświadczeniach (Tabela 1). W jednym eksperymencie przeniesienie genu Ad.C3-tat / HIV. HIL-10 nie spowodowało statystycznie istotnego zahamowania obrzęku stawu (P> 0,05). Figura 4 Przeniesienie genu hIL-10 indukowalnego przez zapalenie zapobiega reaktywacji SCZ. (a) Hamowanie leukocytozy. W dniu 42, zwierzętom wstrzyknięto IA PG-APS w obu stawach skokowych. W dniu 1, zwierzęta wstrzyknięto do obu stawów skokowych ze wskazaną Ad, jak na Fig. 2b. W tym eksperymencie było 12 zwierząt na grupę w dniu. 1. W dniu 0 indukowano reaktywację przez dożylne wstrzyknięcie PG-APS. W dniach 0, 1, 2, 3, 4 i 6 po reaktywacji, dwa zwierzęta z każdej grupy poddano eutanazji, a stawy skokowe perfundowano w celu określenia liczby infiltrujących białych krwinek (WBC) (21). Przedstawiono przebieg czasowy leukocytozy. Każdy pasek pokazuje średnią. SEM pomiarów z czterech stawów. Przedstawiono reprezentatywne dane dwóch eksperymentów. (b) Hamowanie obrzęku stawów. Równolegle do pomiaru leukocytozy, zapalenie oceniano przez pomiar obrzęku stawów. Ponieważ zwierzęta w każdej grupie zostały poddane eutanazji w celu uzyskania płukania stawów, punkty danych reprezentują zmniejszającą się liczbę stawów. Obrzęk obliczono jako (di). (d0), gdzie (di) i (d0) oznaczają średnią średnicę złącza w dniu i oraz w dniu 0. Paski błędów przedstawiają SEM. Wartości P dla porównań między grupami a i b obliczono stosując niesparowany, jednostronny test t Studenta. Dane dotyczące hamowania obrzęku stawów w innych doświadczeniach przedstawiono w Tabeli 1. Tabela Skuteczność terapeutyczna indukowanego przez stan zapalny przeniesienia genu hIL-10 w SCW zapalenie stawów Regulacja homeostatyczna indukowalnej przez zapalenie ekspresji hIL-10 in vivo. Ilościowe oceny hIL-10 w płynie stawowym za pomocą testu ELISA wykazały, że w przypadku braku reaktywacji poziomy hIL-10 w stawach, którym wstrzyknięto Ad.C3-tat / HIV a hIL-10 były na dolnej granicy wykrywalności (1 ng / ml)
[przypisy: implanty dąbrowa górnicza, chirurgia stomatologiczna gdańsk, kuchnia niemiecka prezentacja ]
[więcej w: chirurgia stomatologiczna gdańsk, cykl miesiączkowy kalkulator, wojewódzka przychodnia stomatologiczna ]