Endogenna regulacja terapeutycznego transgenu przywraca homeostazę w stawach artretycznych

Leczenie przewlekłych chorób zapalnych komplikuje nieprzewidywalny, nawracający przebieg kliniczny. Poniżej przedstawiamy nową strategię, w której do stawów wprowadzany jest regulowany przez zapalenie transgen terapeutyczny, aby zapobiec nawrotom zapalenia stawów. W tym celu zaprojektowaliśmy rekombinowany wektor adenowirusowy zawierający dwuskładnikowy promotor indukowalny przez zapalenie, kontrolujący ekspresję cDNA ludzkiej IL-10 (hIL-10). W testach in vitro układ ten miał niską podstawową aktywność i był aktywowany od czterech do pięciu rzędów wielkości przez różne bodźce zapalne, w tym TNF-a, IL-1 (3, IL-6 i LPS. Po wprowadzeniu do stawów szczurów z nawracającym zapaleniem stawów wywołanym streptokokowym zapaleniem ściany komórkowej, transgen IL-10 indukowano równolegle z nawrotem choroby i skutecznie zapobiegał napływowi komórek zapalnych i związanego z nimi obrzęku stawów. Poziom indukowalnego przez zapalenie białka hIL-10 w stawach korelował ściśle z ciężkością nawrotu. Endogennie regulowany terapeutyczny transgen może zatem ustalić ujemne sprzężenie zwrotne i przywrócić homeostazę in vivo, minimalizując jednocześnie ekspozycję gospodarza na rekombinowany lek. Wprowadzenie Reumatoidalne zapalenie stawów jest prototypową przewlekłą chorobą zapalną charakteryzującą się brakiem równowagi mediatorów pro- i przeciwzapalnych. Terapia genowa została zaproponowana jako środek do przywrócenia zaburzonej równowagi poprzez wprowadzenie genów przeciwzapalnych w stawach artretycznych (1). Badania na modelach zwierzęcych wykazały, że technologia transferu genów jest wyjątkowo dostosowana do dostarczania terapeutycznego białka w reumatoidalnym zapaleniu stawów (2); obecnie trwają dwie fazy badań klinicznych u ludzi (3). Głównym problemem pozostaje jednak podejście do terapii przeciwzapalnej w terapii genowej. Ponieważ reumatoidalne zapalenie stawów zazwyczaj postępuje poprzez cykle nawrotów i remisji, wytwarzanie białka terapeutycznego musi być regulowane, aby dopasować się do nawrotowego przebiegu choroby. Opisano wiele wektorów z indukowalnymi przez lek promotorami do uzyskania regulowalnej ekspresji transgenu (4. 8). W tym podejściu ekspresja transgenu in vivo jest regulowana przez doustny lek małocząsteczkowy dostępny doustnie. Jednak ze względu na nieprzewidywalny przebieg choroby, tego rodzaju system będzie wymagał długoterminowych, w dużej mierze empirycznych dostosowań leków dokonywanych przez lekarza lub pacjenta. Nadprodukcja cząsteczek przeciwzapalnych może być związana z tachyfilaksją, toksycznością tkanki lub zwiększoną podatnością na zakażenie. Ponadto dowody eksperymentalne wskazują, że niewłaściwy czas podawania białka przeciwzapalnego może podważyć skuteczność leczenia (9). Aby uniknąć tych problemów, zaproponowaliśmy alternatywne podejście, które nazywamy fizjologicznie responsywną terapią genową (PRGT) (10). W tym podejściu ekspresja transgenu przeciwzapalnego jest autonomicznie regulowana przez promotor indukowalny przez zapalenie. W tym badaniu oceniliśmy możliwość zastosowania PRGT w leczeniu nawracającego zapalenia stawów. W badaniach wstępnych opracowaliśmy dwuskładnikowy układ ekspresyjny, który reaguje energicznie na bodźce zapalne in vivo (11). Tutaj skonstruowaliśmy wektor adenowirusowy niosący cDNA plejotropowej cytokiny przeciwzapalnej, ludzkiej IL-10 (hIL-10), kierowanej przez promotor indukowalny przez zapalenie. Wykazujemy, że śródstawowe (IA) dostarczanie hIL-10 o regulowanej reakcji zapalnej skutecznie zapobiega nawrotom zapalenia stawów paciorkowców (SCW) u szczurów. Rekombinowane białko terapeutyczne wytwarza się w bezpośrednim związku z początkiem, ciężkością i czasem trwania zapalenia, co wskazuje na homeostatyczną regulację terapeutycznego transgenu. Metody Model SCW zapalenia stawów. Samice szczurów Lewis uzyskano z Charles River Laboratories (Wilmington, Massachusetts, USA) i zastosowano w modelu reaktywacji SCW zapalenia stawów. W tym modelu ostre, przejściowe, jednoczasowe zapalenie stawów jest wytwarzane przez wstrzyknięcie IA fragmentów SCW wyizolowanych ze streptokoków grupy A. Podstawowymi składnikami strukturalnymi fragmentów SCW są polimery peptydoglikanu-polisacharydu (PG-APS). Kilka tygodni po wstrzyknięciu IA, dożylna iniekcja PG-APS indukuje reaktywację przewlekłego zapalnego zapalenia stawów we wcześniej uszkodzonych stawach (12). Aby ocenić zapalenie stawów, boczne średnice stawów skokowych mierzono potrójnie za pomocą suwmiarki cyfrowej, jak opisano wcześniej (9, 13). Aby zmniejszyć błąd, wszystkie zwierzęta zostały zakodowane, a pomiary wykonano losowo. W przypadku wymazu z błony maziowej wycięto kostki i wprowadzono dwie igły do jamy stawowej
[przypisy: przychodnia langiewicza rzeszów, kolposkopia szyjki macicy, laboratorium elbląg ul nowowiejska ]
[patrz też: pogotowie stomatologiczne gdańsk, dieta dukana faza uderzeniowa, implanty dąbrowa górnicza ]