Renalase to nowa, rozpuszczalna oksydaza monoaminowa, która reguluje czynność serca i ciśnienie krwi cd

Renalaza metabolizuje katecholaminy. W każdym teście zastosowano 10 mikrogramów białka fuzyjnego GST-renalazę; oksydaza aminowa jest wyrażana jako produkcja H2O2 (nmol / mg / min). (D) Aktywność neralizy jest niewrażliwa na znane inhibitory monoaminooksydazy. Aktywność nerkową oceniano jak opisano w C, z dopaminą, adrenaliną i noradrenaliną jako substratami. Aktywność renalazową badano przy braku inhibitora (Alone), w obecności 1. M clorgyline lub w obecności 1. M pargyline. Aktywność neralizy wyraża się jako arbitralne jednostki fluorescencji / 10 .g białka. W badaniach kontrolnych clorgyline (1 .M) i pargyline (1 .M) hamowały aktywność MAO-A o 83,9%. 2,3% (n = 3) i 82,4%. 1,9% (n = 3), odpowiednio. (E) Oczyszczanie na zasadzie powinowactwa ludzkiej nerki. Przeciwciało poliklonalne anty-nerazę zastosowano do wyizolowania białka z ludzkiego moczu. Ścieżka 1: nerka z ludzkiego moczu; ścieżka 2: kontrola z samym drugorzędowym przeciwciałem. Renalaza degraduje katecholaminy in vitro i reguluje układowe ciśnienie krwi in vivo. Analiza strukturalna wykazała, że renalaza zawiera domenę oksydazy aminowej (Suplementowa Figura 1), co sugeruje, że może odgrywać rolę w utlenianiu aminy. W związku z tym przetestowaliśmy, czy ma on aktywność oksydazy przy użyciu baterii amin jako substratów. Jak pokazano na ryc. 2C, renalaza specyficznie metabolizuje katecholaminy, przy czym preferowanym substratem jest dopamina, następnie epinefryna, a następnie norepinefryna. Na jego aktywność enzymatyczną nie miały wpływu znane inhibitory oksydaz aminowych zawierających FAD, MAO-A i MAO-B (Figura 2D). W badaniach kontrolnych pargyline i clorgyline hamowały aktywność MAO-A o 83,9%. 2,3% (n = 3) i 82,4%. 1,9% (n = 3), odpowiednio. Aby zbadać aktywność oksydazy natywnej nerki i zweryfikować specyficzność przeciwciała przeciw nerek, oczyszczono renalazę z ludzkiego moczu i zbadaliśmy jej aktywność. Jak pokazano na Figurze 2E, oprócz paska o oczekiwanej wielkości (około 35 kDa), wykryto także inny, większy dublet (67. 75 kDa) i może on reprezentować dimeryzację lub agregację pasma 35 kDa. Następnie użyliśmy testu funkcjonalnego, aby potwierdzić tożsamość prążków wykrytych przez przeciwciało poliklonalne. Immunoprecypitat metabolizował katecholaminy o specyficzności substratowej podobnej do rekombinowanej renalazy (przy czym preferowanym substratem jest dopamina, następnie epinefryna, a następnie norepinefryna; n = 4). Co więcej, stwierdziliśmy, że przeciwciało anty-renalazowe hamowało aktywność oksydazy aminowej rekombinowanej nerki o 87,3%. 2,3% (n = 4). Ponieważ renalaza krąży we krwi i rozkłada katecholaminy in vitro, zbadaliśmy jej wpływ in vivo na hemodynamikę sercowo-naczyniową. Jak pokazano na Figurze 3A i Tabeli 1, w ciągu 30 sekund po pojedynczym podaniu dużej dawki rekombinowanej nerki, skurczowe, rozkurczowe i średnie ciśnienie tętnicze zmniejszyły się o 23,5%. 1,3%, 32,6%. 2,9% i 28,9%. 2,7% (n = 8; P <0,001). Ciśnienie krwi powróciło do wartości wyjściowych w granicach 4. minuta (n = 8). Aby dokładniej zbadać mechanizm działania obniżającego ciśnienie, w którym pośredniczy renalaza, monitorowaliśmy szereg parametrów hemodynamicznych. Jak pokazano na rycinie 3, A i B, a szczegółowo w Tabeli 1, nerka zmniejszała skurczowe i końcoworozkurczowe ciśnienie lewej komory, maksymalne ciśnienie lewej komory i szybkość zmiany ciśnienia komorowego (dP / dt), miarę serca. kurczliwość. Ponadto nerka zmniejszała częstość akcji serca, ale obwodowy opór naczyniowy pozostał niezmieniony. Wpływ Renalase na kurczliwość serca i ciśnienie krwi był zależny od dawki (Ryc. 3, C i D). Ryc. 3 Wpływ na parametry nerwowe parametrów hemodynamicznych. (A) Odpowiedź serca przed i po wstrzyknięciu iv bolusa 4 .g / g masy ciała. Strzałka oznacza czas wstrzyknięcia nerki. VP, ciśnienie lewej komory; VP max, maksymalne ciśnienie w lewej komorze; HR, tętno; dP / dt, szybkość zmian ciśnienia w lewej komorze, miara kurczliwości serca. (B) Zmiany ciśnienia i objętości przed i po wstrzyknięciu nerki. (C) Krzywa odpowiedzi na dawkę renalase: kurczliwość serca. (D) Krzywa reakcji na renaturę: średnie ciśnienie tętnicze (MAP). Tabela Wpływ nerki na parametry hemodynamiczne Dyskusja Renalaza jest nową oksydazą aminową zawierającą FAD. Jest krytycznie zależna od FAD dla aktywności oksydazy, ponieważ białko jest nieaktywne, o ile kofaktor nie jest włączony podczas wytwarzania białka (0,1. M FAD dodano do pożywki podczas wytwarzania rekombinowanej nerkowej). Ma słabe podobieństwa AA do MAO-A i MAO-B oraz odmienną specyficzność substratu i profil inhibitora, co wskazuje, że reprezentuje nową klasę oksydaz monoaminowych zawierających FAD. Oksydazy aminowe są enzymami, które metabolizują biogenne aminy i są klasyfikowane zgodnie z naturą dołączonego kofaktora, takiego jak FAD lub topaquinone (TPQ) [patrz też: ziemniaki pieczone przepis, chirurgiczne leczenie otyłości, jakie produkty zawierają węglowodany ] [hasła pokrewne: akademia medyczna gdańsk stomatologia, cukrzycowa choroba nerek, pogotowie stomatologiczne gdańsk nfz ]