Szybkie wytwarzanie szerokiej odporności komórek T u ludzi po pojedynczym wstrzyknięciu dojrzałych komórek dendrytycznych ad 5

Większość SFC specyficznych dla MP to CD8 +, ponieważ reaktywność została utracona przez wyczerpanie limfocytów T CD8 +, ale nie CD4 + (Figura 4c). Gdy krioprezerwowane próbki przed i po immunizacji rozmrożono razem, podobne wyniki odnotowano w teście ELISPOT, ale liczba SFC była o 40. 50% mniejsza niż w świeżych PBMC (nie pokazano). Odpowiadające komórki ELISPOT-dodatnie były zdolne do odpowiedzi na wirus grypy, jak również na MP. Analiza litycznych komórek CD8 + w świeżych masowych PBMC nie wykryła znaczącego wzrostu CTL swoistych dla MP u żadnego z osobników (nie pokazano). Figura 4 (a) Zwiększenie poziomu HLA-A * 0201 ogranicza komórki T reagujące na MP reagujące z MP po impulsach zmiennoprądowych MP. Komórki T reaktywne wobec MP oznaczano ilościowo przy użyciu testu ELISPOT. HLA-A * 0201 ograniczony peptyd gag służył jako kontrola. Wyniki przedstawiono jako liczbę SFC na 2 x 105 komórek PBMC, na początku i 30 dni po wstrzyknięciu kontrolnych DC, MP impulsów DC lub MP bez DC. SEM dla wszystkich pomiarów było <20%. (b) Kinetyka wzmocnienia komórek T reagujących na MP u przedstawiciela (D6). Komórki T reaktywne wobec MP oznaczano ilościowo przy użyciu testu ELISPOT. HLA-A * 0201 ograniczony peptyd gag służył jako kontrola. Dla każdego testu, stopniowane dawki PBMC (25 x 103 do 2 x 105 komórek na studzienkę) inkubowano z 10. M grypy MP. Wyniki przedstawiono jako liczbę SFC na 2 x 105 PBMC na studzienkę, w różnych punktach czasowych. (c) CD8 + charakter komórek T reagujących na MP w teście ELISPOT. Obecność reaktywnych wobec MP komórek T w nierozdzielonych PBMC porównano z obecnością po wyczerpaniu CD4 i CD8 przez panoramowanie. Dane pochodzą od podmiotu D1. Przypomnij odpowiedzi komórek T CD8 + w hodowli tkankowej. Przeciwnie, P2-krotne zwiększenie specyficznych dla MP przypominających CTL było obserwowane u 5 z 6 osobników pozytywnych pod względem HLA-A * 0201a i u żadnego z osobników kontrolnych negatywnych pod względem HLA-A * 0201a (Figura 5a). U 2 pacjentów z dłuższym okresem obserwacji zwiększone odpowiedzi CTL w odpowiedzi na MP utrzymywały się przez 60 do 90 dni po wstrzyknięciu (Figura 5b). Figura 5 (a) Zwiększenie CTL specyficznych dla MPa po impulsowo-impulsowych DC. Komórki T hodowano wspólnie z DC pulsowanymi .M MP (nie spulowane DC jako kontrolą) przez 7 dni (stosunek DC / T = 30: 1) i aktywność lityczną testowano wobec odpowiednich celów jak opisano w Methods (stosunek E / T = 20: 1). Przedstawione dane pochodzą sprzed wstrzyknięcia i 30 dni po wstrzyknięciu kontrolnym DC i iniekcji DC pulsowanej antygenem i stanowią procentową lizę specyficzną dla MP po odjęciu lizy tła z nieulegowanymi DC. SEM dla wszystkich pomiarów było <20%. (b) Wzmocnienie CTL związanych z MP pamięci po impulsowym wstrzykiwaniu DC. Komórki T hodowano wspólnie z DC poddanymi pulsacji MP (nie spulowane DC jako kontrolne) przez 7 dni (stosunek DC / T = 1:30), a lityczną aktywność badano wobec docelowych T2 pulsowanych lub nieulegowanych T2 (stosunek E / T = 20: 1). Przedstawione dane przedstawiają procentową lizę specyficzną dla MP po odjęciu lizy tła z nieulegowanymi DC, u 2 reprezentatywnych podmiotów (D1 i D3), z dłuższym okresem obserwacji. SEM dla wszystkich pomiarów wynosiło <10%. Gdy krioprezerwowane PBMC przed immunizacją przed i po immunizacji rozmrożono i wspólnie hodowano z DC lub nieulegającymi DC, ekspansję swoistych dla MP komórek T, ocenianych przez wiązanie tetrameru, odnotowano w dostępnych próbkach preimmunizacji tylko z z 3 badanych osobników, które korelowały z tematami. dane wstępnej immunizacji ELISPOT (ryc. 6). Jednakże w próbkach po immunizacji DC wykrywano znacznie wyższe ekspansję swoistych dla MP komórek T CD8 +, z wiązaniem tetrameru we wszystkich 3 próbkach oznaczonych po 7 dniach (D5 i D6, Figura 6) i 90 dni (D1; Figura 7) po immunizacji. Fig. Pamięć specyficzna dla 6 MP Komórki T CD8 + są ekspandowane po wstrzyknięciu DC pulsującym MP. PBMC pobrane przed lub po immunizacji DC-pulsowanymi DC rozmrożono i hodowano z autologicznymi nie spienionymi DC (.) Lub DC-DC [DC (MP)]. Po 7-dniowej hodowli liczbę limfocytów T CD8 + specyficznych dla MP oznaczano ilościowo przez wiązanie tetrameru A * 0201-MP. (Do góry) D5, przed i 7 dni po immunizacji; (środek) D6, przed i 7 dni po immunizacji; (dół) D1, przed i 90 dni po immunizacji. Procent limfocytów T CD8 + wiążących tetramer odnotowano w prawym górnym kwadrancie. Dyskusja Nasze badanie pokazuje, że dojrzałe DC są skutecznymi adiuwantami u ludzi, zdolnymi do szerokiego rozszerzania odporności komórek T. w tym nie tylko komórek pomocniczych T CD4 +, ale także efektora CD8 + i limfocytów T pamięci. Zgodnie z naszą wiedzą, pierwszy raport wykorzystujący te DC, dostarcza pierwszych kontrolowanych dowodów immunogenności DC u ludzi. Ludzie szybko reagują na pojedyncze wstrzyknięcia dojrzałych DC, w ciągu tygodnia w wielu przypadkach, w ciągu 30 dni [hasła pokrewne: kolposkopia szyjki macicy, nadciśnienie tętnicze profilaktyka, nietolerancja laktozy badania ] [patrz też: cykl miesiączkowy kalkulator, wojewódzka przychodnia stomatologiczna, przychodnia langiewicza rzeszów ]