Szybkie wytwarzanie szerokiej odporności komórek T u ludzi po pojedynczym wstrzyknięciu dojrzałych komórek dendrytycznych

Komórki dendrytyczne (DC) są silnymi komórkami prezentującymi antygen, które inicjują ochronną odporność komórek T u myszy. Aby zbadać immunogenność DC u ludzi, wstrzyknęliśmy 9 zdrowych osobników podskórnie kontrolnym zastrzykiem autologicznych dojrzałych DC pochodzących z monocytów, po czym 4. 6 tygodni później przez DC stymulowane hemocyjaniną skałoczepa (KLH), HLA-A * 0201 peptyd z matrycą wirusa grypy (MP) o ograniczonym poziomie dodatnim i toksoid tężcowy (TT). Czterech kolejnych osobników otrzymało te antygeny bez DC. Wstrzyknięcie nie spienionych DC lub samych antygenów nie uodporniło się. Szczepienie komórek T CD4 + do KLH obserwowano u wszystkich 9 osobników, którym wstrzyknięto DC z pulsami KLH, i zwiększenie odporności specyficznej wobec TT limfocytów T zaobserwowano u 5 z 6 osobników, którym wstrzyknięto DC z pulsami TT. Wstrzyknięcie antygenowo-impulsowych DC doprowadziło do znacznego wzrostu świeżo wyizolowanych komórek T CD8 + wydzielających IFN-y we wszystkich 6 osobnikach pozytywnych HLA-A * 0201a, już po 7 dniach po wstrzyknięciu. Gdy komórki T były wzmocnione w hodowli, nastąpił wzrost komórek wiążących tetramer MHC i cytotoksycznych komórek T po szczepieniu DC. Dane te dostarczają pierwszych kontrolowanych dowodów immunogenności DC u ludzi i pokazują, że pojedyncze wstrzyknięcie dojrzałych DC szybko rozszerza odporność komórek T. Wprowadzenie Większość konwencjonalnych szczepionek składa się z inaktywowanych patogenów lub ich podjednostek i przede wszystkim wywołuje odporność humoralną. W przeciwieństwie, okazało się, że trudno jest indukować łączną odporność komórek T CD4 + i CD8 + u ludzi (1). Komórki dendrytyczne (DC) są komórkami prezentującymi antygen (APC) wyspecjalizowanymi do inicjowania odporności komórek T, w tym cytotoksycznych limfocytów T (CTL), które zabijają zainfekowane wirusem lub złośliwe cele (2). DC zazwyczaj znajdują się w tkankach w niedojrzałej postaci, gdzie specjalizują się w wychwytywaniu antygenu. Po wychwyceniu antygenu i w odpowiedzi na bodźce zapalne, DC przechodzą w tryb stymulacji komórek T przez proces określany jako dojrzewanie i migrują do węzłów chłonnych w celu zainicjowania odporności (2). Dojrzewanie DC wiąże się z regulacją w górę cząsteczek kostymulujących, seversalfoldowym wzmocnieniem ich funkcji APC i ekspresją receptorów chemokin, które promują migrację do węzłowych obszarów komórek T (3). W kilku badaniach na zwierzętach immunizacja DC zawierającymi antygen skutecznie stymuluje zarówno pomocniczą limfocytów T CD4 +, jak i cytotoksyczną odporność komórek T CD8 +. Prowadzi to do ochronnej odporności na nowotwory i czynniki zakaźne (4. 7). Istnieją wstępne doniesienia o stosowaniu niedojrzałych DC u pacjentów z nowotworami złośliwymi (8. 12). Badania te głównie podkreślały kwestie bezpieczeństwa i sugerowały potencjalną skuteczność przeciwnowotworową. Jednak w tych badaniach trudno jest ocenić immunogenność DC, ponieważ odporność na komórki T CD8 + nie została określona ilościowo, a ponieważ w niektórych badaniach pacjenci często otrzymywali również rozpuszczalne antygeny, tj. Hemocyjaninę skałoczepa (KLH) lub idiotyp białko oprócz DC (8). Ocena odporności komórek T była w dużej mierze oparta na reakcjach nadwrażliwości typu późnego (DTH) lub odpowiedziach proliferacyjnych in vitro po wielokrotnych dawkach DC; spontaniczne kontrole DC nie były testowane. Ponadto w niektórych badaniach hodowano DC w obecności FCS, o którym wiadomo, że indukuje syngeniczne odpowiedzi komórek T w hodowli i może wytwarzać nieswoiste efekty immunomodulujące in vivo (10, 12). Biologia DC jest na tyle zawiła, że ich zastosowanie jako adiuwantów będzie wymagać ilościowych testów komórek T w celu określenia optymalnych warunków immunizacji (13). Opracowaliśmy metodę powtarzalnego wytwarzania dojrzałych DC z prekursorów monocytów krwi (14). Wybraliśmy te dojrzałe DC do aktywnej immunizacji, ponieważ są one silniejszymi APC in vitro i nie powracają do makrofagów po wycofaniu cytokin, jak w przypadku niedojrzałych DC stosowanych w innych badaniach (14). Zajęliśmy się zdrowymi podmiotami, aby umożliwić nam badanie biologii DC in vivo u ludzi bez zmiennych zakłócających związanych z guzem niedoborów odporności lub chorób współistniejących. Tutaj używamy kilku parametrów specyficznych dla antygenu funkcji komórek T, w tym nowszych testów ilościowych (15, 16), aby pokazać, że dojrzewające w DC antygeny dojrzałe szybko generują szeroką odporność komórek T u ludzi. Odpowiedzi komórek T są widoczne zarówno w przedziałach komórek T CD4 +, jak i CD8 +. Metody Projekt badań. Schemat do wstrzykiwania DC pokazano na fig. 1. Jako dodatkowe kontrole, 4 osobników otrzymało podskórne zastrzyki samych antygenów bez adiuwantów. Rysunek Schemat badania dla wtrysku DC. Cztery dodatkowe kontrole otrzymały jedynie antygen. Podmioty ludzkie. Normalne zdrowe osoby dorosłe rekrutowano za pośrednictwem reklamy. Kryteria kwalifikacji były następujące: wiek, 18. 65 lat; brak przewlekłego zakażenia (np. zapalenie wątroby, gruźlica) lub nowotwór złośliwy; i dopuszczalna w wątrobie (stężenie aminotransferaz w surowicy <3 górnej granicy prawidłowej), nerek (stężenie kreatyniny w surowicy <1,5 górnej granicy prawidłowej) i funkcja hematologiczna (hematokryt> 30%, granulocyty> 500 / .l i płytki krwi> 100 000 / .l)
[podobne: przychodnia langiewicza rzeszów, kolposkopia szyjki macicy, chirurgiczne leczenie otyłości ]
[więcej w: aldemed zielona góra dermatolog, nadciśnienie tętnicze profilaktyka, pogotowie stomatologiczne gdańsk ]