Wirusowe białko, które selektywnie obniża poziom ICAM-1 i B7-2 i moduluje kostymulację komórek T ad 5

Jednak aktywacja ta została znacznie zmniejszona (60-80%) poprzez ekspresję K5 w linii BJAB, co wskazuje, że redukcja silnie atenuowanej aktywacji komórek T B7-2. Występowała jednak niewielka ilość resztkowej aktywacji RE / AP obserwowanej w obecności K5 (Figura 3a). W przeciwieństwie do pierwotnych komórek B, które nie wyrażają B7-1 w stanie spoczynkowym, komórki BJAB konstytutywnie wyrażają zarówno B7-1, jak i B7-2; spekulowaliśmy, że ta rezydualna aktywacja była spowodowana obecnością B7-1 na powierzchni komórki BJAB. Zgodnie z tym, tę resztkową aktywność RE / AP można zlikwidować przez inkubację współhodowli BJAB-K5 / Jurkat z Ab (A-B7-1) (Figura 3a). Zatem ekspresja K5 skutecznie usuwa praktycznie wszystkie funkcjonalne B7-2 z powierzchni komórki. Znaczenie pozostałych B7-1 zostanie rozważone w sekcji Dyskusja. Figura 3 aktywacja komórek T przez ekspresję komórek BJAB K5. (a) Dwadzieścia cztery godziny po transfekcji plazmidem reporterowym RE / AP komórki Jurkat stymulowano przez inkubację z komórkami BJAB i SEE. Aktywację Jurkata oznaczono ilościowo za pomocą testów lucyferazy 16 godzin po stymulacji. Każdy test lucyferazy przeprowadzono trzykrotnie w co najmniej trzech różnych niezależnych eksperymentach transfekcji. W warunkach blokowania komórki BJAB inkubowano wstępnie z Ab. 30 minut przed dodaniem komórek Jurkat i SEE. (b) Komórki Jurkat transfekowano plazmidem reporterowym NFAT, AP-1 lub NF-kB i stymulowano jak w. Stymulacja za pomocą TPA / jonomycyny była stosowana jako kontrola pozytywna. (c) Komórki Jurkat pozostawiono niestymulowane, stymulowano PMA / iono lub stymulowano komórkami BJAB i SEE. Po 16 godzinach komórki wybarwiono anty-CD19 Ab skoniugowanym z R-fikoerytryną i anty-CD69 skoniugowanym z fluoresceiną. Komórki Jurkat zidentyfikowano jako negatywne pod względem CD19 (marker komórek B, obecny na powierzchni komórek BJAB). Histogramy przedstawiają ekspresję CD69 na komórkach Jurkat. Stosując identyczny format testu, ale zastępując reporter RE / AP w komórkach Jurkat reporterem lucyferazy zależnym od aktywacji NFAT, stwierdziliśmy, że istotnie mniej aktywności NFAT indukowano w komórkach T stymulowanych komórkami BJAB-K5 niż przez kontrolne komórki BJAB (fig. 3b). Mniejsze, ale wciąż znaczące hamowanie aktywacji AP-1 obserwowano podobnie, gdy K5 ulegał ekspresji w komórkach BJAB prezentujących SEE (Figura 3b). Aktywacja NF-kB zależna od SEE była również silnie zmniejszona przez ekspresję K5 (Figura 3b). Tak więc, szlaki, które nie są zależne od interakcji B7-CD28 są również obniżone przez ekspresję K5. Interakcje ICAM-LFA przyczyniają się do niektórych z tych zdarzeń aktywacyjnych (43, 44). Zdolność K5 do upośledzenia aktywacji limfocytów T również badano poprzez badanie ekspresji powierzchniowej CD69 w komórce T odpowiadającej. CD69 jest markerem aktywacji komórek, który jest wyraźnie indukowany za pośrednictwem sygnalizacji za pośrednictwem TCR. Komórki BJAB eksprymujące K5 lub wektor kontrolny dodano do komórek Jurkat w obecności SEE, a poziomy CD69 wyrażane w komórkach Jurkat badano za pomocą cytometrii przepływowej. Jak pokazano na Figurze 3c, ekspresja K5 w komórkach APC znacznie upośledziła regulację w górę CD69 w reagujących komórkach T. Ekspresja K5 nie prowadzi do odporności komórek na cytolizę za pośrednictwem NK. We wcześniejszej pracy Ishido i in. (39) donoszą, że ekspresja K5 zmniejsza podatność komórek docelowych na zabijanie za pośrednictwem linii komórkowej NK YTS. Ta linia komórkowa, pochodząca od pacjenta białaczkowego, jest bardzo nietypowa pod tym względem, że wykazuje ekspresję CD28 i może rozpoznawać cząsteczki B7 na powierzchni komórki docelowej (45). Ishido i in. wyraźnie pokazał, że ucieczka od zabijania YTS była spowodowana przez regulację w dół B7-2 za pośrednictwem K5 i zasugerowała, że funkcją K5 było promowanie ucieczki przed zabijaniem komórek NK (do czego komórki zakażone KSHV byłyby w przeciwnym razie podatne na powierzchniowe cząsteczki MHC-I pośredniczone przez wspólne działanie K3 i K5) (33. 35). O ile ucieczka od zabijania YTS jest wyraźnie udokumentowana, pozostaje niejasne, czy pierwotna funkcja K5a in vivo pośredniczy w ucieczce z komórek NK, zabijając bardziej ogólnie. Figura 4 pokazuje, że gdy populacja komórek NK w krążeniu czterech niezależnych zdrowych ludzi jest badana za pomocą cytometrii przepływowej, komórki zawierające markery NK (CD56) nie mają dowodów ekspresji CD28. Rzeczywiście podobne obserwacje zaobserwowano wcześniej w hodowanych pierwotnych liniach ludzkich komórek NK ekspandowanych z przedziału PBMC (46). Aby określić funkcjonalne konsekwencje ekspresji K5 w cytotoksyczności za pośrednictwem komórek NK, w teście zabijania wykorzystano bardziej reprezentatywną linię komórkową NK, NKL. Podobnie jak pierwotne komórki NK, komórki NKL nie eksponują powierzchni CD28 (47)
[hasła pokrewne: chirurgiczne leczenie otyłości, wojewódzka przychodnia stomatologiczna gdańsk, przepis na dietetyczne ciasto ]
[hasła pokrewne: wojewódzka przychodnia stomatologiczna gdańsk, ortodonta gdańsk nfz, akademia medyczna gdańsk stomatologia ]