Zespół Hyper-IgM typu 4 z wewnętrznym selektywnym niedoborem limfocytów B w rekombinacji z przełączaniem klasy Ig czesc 4

Odsetek komórek B pamięci CD27 + był prawidłowy (> 10% komórek CD19 + B, zakres: 10,0. 41,9%) u pięciu pacjentów (P5, P9 P12) i niski (<10% komórek B CD19 +, zakres: 2,3. 9,5%) u ośmiu pacjentów. Liczba i testowane funkcje komórek T i komórek NK były prawidłowe (dane niepokazane). Figura Poziomy IgG w surowicy u pacjentów HIGM4 i HIGM2. Poziome słupki wskazują średnie poziomy dla każdej grupy pacjentów. Przedstawiono poziomy z kontrolek dobranych pod względem wieku. Tabela Objawy kliniczne pacjentów z HIGM4 sCD40L + indukowaną rIL-4 (3 proliferacją i CSR komórek B od pacjentów HIGM4. sCD40L + indukowana rIL-4 (3 proliferacja komórek B była prawidłowa u wszystkich badanych pacjentów (n = 15), co kontrastowało z całkowitym brakiem CSR w kierunku IgE (n = 15) i IgG (n = 4) (Figura 2), defekt obecne nawet u pacjentów wykazujących resztkowy CSR in vivo. Ponieważ komórki HIGM2 (z niedoborem AID) wykazują ten sam fenotyp (14) i chociaż sekwencja genu AID była normalna u pacjentów HIGM4, badaliśmy poziomy transkryptu mRNA AID w aktywowanych komórkach B od siedmiu pacjentów. Transkrypty AID znaleziono u wszystkich badanych pacjentów (Figura 3a), wskazując, że defekt CSR znajduje się poniżej indukcji ekspresji AID. Do aktywacji CSR wymagane jest wywołanie transkryptów linii genu zarodka IgG (GLT). Aby zidentyfikować etap, w którym pojawia się defekt CSR, analizowaliśmy. GLT (I. -C.) Z komórek B HIGM4. We wszystkich siedmiu testowanych przypadkach, indukowano GLT po aktywacji sCD40L + rIL-4, co wskazuje, że ten wczesny etap CSR zachodzi normalnie. Miareczkowanie GLT w porównaniu z transkryptami CD19 wykonywanymi w czterech przypadkach (P1, P5, P7, P15) nie ujawniło żadnych oczywistych różnic w porównaniu z kontrolami (Figura 3b). W przeciwieństwie do tego, transkryptów koło IgE (| CT, transkrybowanego RNA z wyciętego kołowego DNA podczas CSR) nie znaleziono w komórkach B żadnego z badanych pacjentów (Figura 3a). Nie wykryto także funkcjonalnych transkryptów genu IgE (FT, VH-C3) u trzech pacjentów (P1, P2, P5) i byli bardzo słabo dodatni u czterech pacjentów (P7, P8, P11, P15). Transkrypty funkcjonalne genu IgG (FT, VH-C3) również nie zostały wykryte w czterech przypadkach (P1, P2, P5, P8) i były słabo pozytywne w trzech (P7, P11, P15). Jednakże, w przeciwieństwie do kontroli, nie wykryto indukowanej produkcji IgE i IgG w supernatantach hodowli (Figura 2b). Odzwierciedla to, że wykrywanie FTs jest techniką bardziej czułą niż wykrywanie IgG w teście ELISA. Figura 2B odpowiedzi komórek na aktywację sCD40L + rIL-4. (a) Normalna odpowiedź proliferacyjna komórek B na stymulację rL-4 sCD40L u pacjentów z HIGM4. PBMC z dopasowanych wiekowo kontroli (n = 24), pacjentów HIGM2 (n = 16) i pacjentów HIGM4 (n = 13) stymulowano sCD40L i rIL-4 przez 5 dni. Białe paski, bez stymulacji; czarne paski, 12-dniowa stymulacja sCD40L + IL-4. Pokazano średnie wychwycie [3H] tymidyny (cpm). Paski błędów pokazują SD. (b) Wadliwy CSR IgE i IgG po stymulacji przez sCD40L + rIL-4 u pacjentów z HIGM4. PBMC z prawidłowych kontroli (n = 20 dla IgE, n = 5 dla IgG), pacjentów HIGM2 (n = 20) i pacjentów HIGM4 (n = 13 dla IgE, n = 4 dla IgG) stymulowano sCD40L + rIL-4 przez 12 dni. Białe paski, bez stymulacji; czarne paski, 12-dniowa stymulacja sCD40L + IL-4. Stężenia IgE i IgG w supernatantach hodowli oznaczono ilościowo za pomocą testu ELISA. Pokazane są wartości średnie. Paski błędów pokazują SD. Figura 3Detekacja transkryptów RNA genów związanych z CSR. (a) Transkrypty RNA CD19 (jako kontrola), AID, linia zarodkowa (. GLT), koliste (. CT) i funkcjonalne (. FT) transkrypty IgE i funkcjonalne transkrypty dla IgG (. FT) wykrywano za pomocą RT-PCR po stymulacji sCD40L + rIL-4 przez 5 dni u osobników kontrolnych (C) i u pacjentów HIGM4 (P1, P2, P5, P7, P8, P11, P15). (b) Transkrypty CD19 i poziomy ATT analizowano przy użyciu różnych ilości cDNA (rozcieńczenie 1: 1, 1:10, 1: 100 i 1: 1000) w RT-PCR dla wybranych przypadków (P1, P5, P7, P15 ). Wykrywanie wywołanych przez CSR DSB DNA w regionie przełączającym. ciężki łańcuch komórek B od pacjentów HIGM4. Ponieważ DSB DNA występują w szczególności w S. regiony podczas CSR (15) w normalnych warunkach, ale są uszkodzone w aktywowanych komórkach B z niedoborem AID (N. Catalan i wsp., manuscript przedłożony do publikacji) (18), szukaliśmy DSB w S. region oczyszczonych komórek B od pacjentów HIGM4 po 5-dniowej hodowli w obecności sCD40L + rIL-4. Aktywowany, żywotny CD19 + PI. Komórki B oczyszczono przez sortowanie FACS, a do wykrycia DSB w S. Zastosowano LM-PCR. regiony (14). Po hybrydyzacji produktów LM-PCR ze znakowaną 32P sondą swoistą dla DNA S, wykryto kilka pasm w komórkach B (2 x 103 do 25 x 103 komórek na ścieżkę) od sześciu testowanych pacjentów HIGM4 (P1, P2, P4, P6 A P8) oraz w komórkach B z kontroli, ale nie w aktywowanych komórkach T (Figura 4b)
[podobne: jakie produkty zawierają węglowodany, zdrowe jedzenie przepisy, ziemniaki pieczone przepis ]
[hasła pokrewne: palenie papierosów a karmienie piersią, kolposkopia szyjki macicy, wojewódzka przychodnia stomatologiczna w gdańsku ]